《生化危機：0》發售于2002年11月11日。

講述的是：1998年7月23日，浣熊市郊區一輛正在行駛的保護傘公司的火車遭到變異水蛭的襲擊，與此同時浣熊市警察局派出STARS的精英小隊（布拉瓦小隊）前往浣熊市郊區調查最近的多起殺人食人獵奇兇殺事件。

小隊乘坐直升機飛往事件頻發的現場，卻在途中直升機引擎因過度害怕停止工作，于是小隊被迫降落，隨后發現破壞的囚車和慘死的海軍，小隊隊長下達追蹤囚犯比利的命令后分開行動，我們的0代女主角瑞貝卡進入火車調查，遇到了從未見過的喪尸以及比利。

由于眼前的種種問題，兩人開始合作卻意外地來到了保護傘公司在浣熊市的研究所，發現已經和水蛭變異結合的馬庫斯博士，兩人阻止了馬庫斯的復仇，隨后逃離研究所，并在兩人合作的過程中瑞貝卡對比利改觀，之后謊稱比利死亡。

《生化危機0》的歷史可以追溯到1999年，CAPCOM在99年"東京電玩展秋"上公布了N64版的《生化危機0》。當時由于N64版《生化危機2》的順利完成，讓CAPCOM相信在卡帶媒體上推出"生化危機"同樣可行。于是《生化危機0》的消息開始不斷公布。人們很快就知道了該作中將全新登場的Billy Coen。CAPCOM稱，玩家們將會在該作中揭開《生化危機1》中殘留的一些迷題，并將知道更多有關安布雷拉公司和STARS Bravo分隊的情況。2000年E3大展和"東京電玩展春"上CAPCOM公開了《生化危機0》20％完成度的試玩版，在當時就出現了瑞貝卡和比利同屏輔助行動的設定。然而在E3之后，與《生化危機1.5》一樣，《生化危機0》一度開始沉寂，CAPCOM不再發布有關該作的任何消息。有流言稱該作已經轉移平臺甚至可能已經終止開發。然而就是在2001年9月，三上真司發出那番驚動業界的宣言……

據"生化0"開發者表示，盡管經歷幾次延期，《生化危機0》的開發進展還是相當順利的。該開發組也意識到一張卡帶的容量確實不夠，而增加卡帶則意味著大幅提升成本。于是該作就被考慮移植到任天堂即將發售的NGC平臺上。因而NGC上的《生化危機0》事實上并沒有在N64的基礎上做出太大的改變，只是在畫面上有了翻天復地的大變化。

2002年E3大展上，NGC版《生化危機0》正式亮相。盡管復刻版《生化危機》超高水平的畫面表現，讓玩家們對于《生化危機0》的畫面表現并沒有太多驚異之處，然而由于是原創作品，該作還是吸引了大批玩家的注意。NGC版《生化危機0》在2002年11月與美日兩地同步上市，雖然不可能再現以往地輝煌，不過相對NGC有限地擁有量而言，游戲地銷量還算是相當不錯的。在日本當即就獲得了銷量冠軍，而在美國方面也位列前十，該作在美國發售時展開了極大的宣傳造勢活動，其所取得的成績也超過了復刻版《生化危機》。

Bravo小隊的直升機失事并降落在浣熊市森林，各隊員于是準備分開搜索該地區。瑞貝卡在搜索列車中遇見了疑為殺人犯的比利。列車后來啟動并撞到安布雷拉訓練施設附近的隧道里，而這里曾經是由James Marcus博士所負責，此人曾是威斯克和威廉姆博士的導師然而他卻在幾年前神秘失蹤。

瑞貝卡和比利的一舉一動似乎總是被威斯克和威廉姆所監控，而一位年輕的神秘男子似乎一直掌握著他們的行動進程，而他似乎與威斯克及威廉姆也有敵意。原來此人正是詹姆斯博士，幾年前被威斯克與威廉姆博士陷害并奪取了試驗成果，或許是命不該絕感染了"水蛭皇后"病毒。最后瑞貝卡和比利利用其怕光的弱點將其一舉擊滅了。

《生化危機0》的情節解開了系列中的諸多謎題，還讓人們更多地了解了威斯克以及威廉姆博士的背景。在游戲系統方面也加入了不少新要素。異次元箱的設定消失，這一點讓一些玩家們有點不大適應，不過也因此帶來了一些全新的玩法。另外最明顯的特色就是玩家要不斷切換控制兩位主角才能順利進行游戲，另外解迷方面也需要兩個人的通力配合，而兩個人合作作戰也帶來一些很有趣的作戰方法。另外該作在難度上也是系列最高的，游戲中彈藥非常有限，玩家們經常都要辛辛苦苦的將子彈省下來到BOSS戰中再用。